您好,今天小编胡舒来为年夜家解答以上的题目。结晶紫染色,结晶紫相信良多小火伴还不知道,此刻让我们一路来看看吧!
1、结晶紫染色法测定细胞数: 1.在96孔细胞培育板各孔中加0.1ml含5×104~10×4 WEHI-164细胞的培育液(含10%小牛血清的RPMI-1640培育液),37℃ 5% CO2的二氧化碳培育箱中培育2~3小时,让细胞帖壁。
2、 2.用RPMI-1640培育液10倍递次稀释TNF尺度品,按照需要3~5倍递次稀释待检样品,每孔加0.1ml稀释的尺度品或待检样品,每一个稀释度3个反复孔。
3、对比孔6个,3个阳性对比孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培育液,3个阴性对比孔各加100μl RPMI-1640培育液。
4、继续培育18~24小时。
5、 3.甩去培育液,用PBS谨慎洗涤一次,每孔加0.1ml 10%甲醇溶液固定细胞30秒钟。
6、 4.吸去甲醇溶液,每孔加0.1ml结晶紫染液,室温中放置20分钟。
7、 5.轻轻甩去染色液,用蒸馏水洗涤各孔,将培育板颠倒于吸水纸上吸干水份。
8、天然干燥或37℃烘干。
9、此板可以在室温中持久保留。
10、 6.测定前,每孔加0.1ml 33%醋酸脱色,充实振荡后在570nm处测定光接收度。
11、用光接收度(OD)值对样品稀释度作图,比力尺度品曲线和待检样品曲线便可获得待测样品中的细胞因子活性。
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